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對(duì)肽樣品的質(zhì)譜分析前使用SPE小柱脫鹽的操作方法

更新時(shí)間:2015-07-03      點(diǎn)擊次數(shù):6551

對(duì)肽樣品的質(zhì)譜分析前使用SPE小柱脫鹽的操作方法 

SPE脫鹽操作對(duì)于LC-MS分析很重要,對(duì)于常規(guī)LC-UV分析不是必需操作。 

試劑和設(shè)備:所有的試劑應(yīng)在使用前新鮮配制。 

當(dāng)使用1 mL C18 SPE柱時(shí) (貨號(hào):218SPE1000)時(shí),推薦的操作方法是: 

  1. 1.0 mL 乙腈預(yù)活化小柱。 
  2. 0.5 mL 0.1% TFA水溶液預(yù)平衡小柱。然后用0.5mL再重復(fù)一次。 
  3. 0.2 mL 含有0.1-0.2% TFA的肽樣上樣到SPE柱上,肽被SPE保留。 
  4. 0.5 mL 0.1% TFA水溶液清洗SPE小柱,除去弱保留的雜質(zhì)。 
  5. 0.2 mL 75:25 (或甚至 90:10) 不含任何TFA的乙腈/水溶液將肽從SPE柱上洗脫下來(lái)。 
  6. 使用氮?dú)饬鳎ɑ蚴褂谜婵针x心管,加熱不應(yīng)超過30攝氏度)將洗脫收集物揮發(fā)至約10 μL。 
  7. 加入190 μL 含有0.2% 甲酸和 0.01% TFA的 5:95 乙腈/水溶液。 
  8. 渦旋混合后,樣品存放在冰箱中。此樣品即可用于LCMS進(jìn)樣分析。 

注意:要讓溶液流過SPE小柱,可在SPE柱管上方施加正壓。施加正壓的辦法可以是將一個(gè)1000μL 塑料吸液槍頭(pipet tip)加在氮?dú)夤苈飞希缓髮⒋宋簶岊^摁在SPE小柱的頂端開口端。

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